淀粉分支酶(SBE)測(cè)定試劑盒 微量法
測(cè)定意義:SBE(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶,測(cè)定SBE活性在淀粉生物合成、農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義
測(cè)定原理:淀粉和碘結(jié)合后在660nm有特征光吸收,SBE可切斷支鏈淀粉側(cè)支,從而降低了淀粉-碘復(fù)合物在660nm吸收值,一定時(shí)間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。
需要的儀器,耗材:可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
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淀粉分支酶(SBE)測(cè)定試劑盒 微量法
一、粗酶液提取按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。二、測(cè)定步驟試劑名稱(μL) 對(duì)照管 測(cè)定管 95℃水浴 1min 后滅活的粗酶液 250 粗酶液 250 試劑一 320 320 試劑二 30 30 混勻,37℃準(zhǔn)確保溫 20 min,95℃水浴 1 min(蓋緊防止水分散失),冷卻試劑三 500 500 試劑四 40 40 混勻,室溫靜置 10min,用蒸餾水調(diào)零,660nm 處讀取各管吸光值。,注意: 1、 可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進(jìn)行 1min95℃水浴處理。 2、 試劑一如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混勻。
1、按照蛋白濃度計(jì)算單位的定義:以波長(zhǎng) 660nm 的吸光度下降百分率表示,每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每降低 1%碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。 SBE 活性(U/mg prot)=( A 對(duì)照管-A 測(cè)定管)/A 對(duì)照管÷Cpr ×100 2、按照樣本鮮重計(jì)算單位的定義:以波長(zhǎng) 660nm 的吸光度下降百分率表示,每 g 組織在反應(yīng)體系中每降低 1%碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。 SBE 活性(U/g 鮮重)=(A 對(duì)照管-A 測(cè)定管)/A 對(duì)照管÷(W÷V 樣總)×100 V 樣總:提取液總體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,5min。
相關(guān)文獻(xiàn):
《ARSENATE INDUCED CHLOROSIS 1/ TRANSLOCON AT THE OUTER ENVOLOPE MEMBRANE OF CHLOROPLASTS 132 Protects Chloroplasts from Arsenic Toxicity 》 作者:Peitong Wang, Xi Chen, Xuan Xu, Chenni Lu, Wei Zhang, Fang-Jie Zhao 期刊:Plant physiology 影響因子:6.305 PMID: