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可溶性淀粉合成酶(SSS)測定試劑盒 微量法

2024/9/14 11:09:32  作者:索萊寶


 可溶性淀粉合成酶(SSS)測定試劑盒 微量法

測定意義:SSS(EC 2.4.1.21)通常以游離態(tài)存在于質(zhì)體基質(zhì)中,催化淀粉鏈延長,主要負(fù)責(zé)支鏈淀粉的合成。

測定原理:SSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時生成ADP,在反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,NADPH生成量與前一步反應(yīng)中ADP生成量呈正比,340nm下測定NADPH增加量即可計(jì)算SSS活性。

需要的儀器,耗材:紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

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可溶性淀粉合成酶(SSS)測定試劑盒 微量法

試劑一:液體×1 支,-20℃保存;臨用前加入 250μL 蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑 4℃ 保存;試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存;臨用前加入 250μL 蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑 4℃ 保存;反應(yīng)液Ⅰ的配制:臨用前取液體一、粉劑一、粉劑二和粉劑三各一支,依次把粉劑一、粉劑二和粉劑三轉(zhuǎn)移到液體一中混合溶解。反應(yīng)液Ⅱ的配制:臨用前取液體二、粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七各一支,依次把粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七轉(zhuǎn)移到液體二中混合溶解。反應(yīng)液Ⅲ的配制:臨用前取液體三、粉劑八、粉劑九和粉劑十各一支,依次把粉劑八、粉劑九和粉劑十轉(zhuǎn)移到液體三中混合溶解。

 

一、粗酶液制備按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。二、測定步驟 1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長 340nm,蒸餾水調(diào)零。 2、在 EP 管中按順序加入下列試劑試劑名稱(μL) 測定管樣本 150 反應(yīng)液Ⅰ 270 混勻,30℃保溫 20 min,置沸水浴中 1 min(蓋緊,防止水分散失),冰浴冷卻反應(yīng)液Ⅱ 150 混勻,30℃保溫 30 min,置沸水浴中 1 min(蓋緊,防止水分散失),冰浴冷卻,10000g 25℃離心 10min,取上清液上清液 450 反應(yīng)液Ⅲ 300 試劑一 10 試劑二 10 混勻后立即在 340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。注意:反應(yīng)液Ⅰ如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混勻。

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