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單胺氧化酶(MAO)活性檢測試劑盒說明書

2024/9/9 9:24:53  作者:索萊寶


 

 
BC0015 -- 1 頁,共 3
單胺氧化酶(MAO)活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號:BC0015
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱
規(guī)格
保存條件
提取液一
液體 110 mL×1
2-8℃保存
提取液二
液體 110 mL×1
2-8℃保存
試劑一
液體 45mL×3
2-8℃保存
試劑二
液體 3 mL×1
2-8℃保存
產(chǎn)品說明:
MAOEC1.4.3.4)包括 MAO-A MAO-B,是一種結合在線粒體外膜上的黃素蛋白,可催化神經(jīng)遞質(zhì)和生
物胺氧化脫氨。單胺氧化酶與機體老化有關,被認為是衰老的標志,其主要存在于脊椎動物的各種器官,特別是
分泌腺、腦、肝臟,在無脊椎動物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝,含量較低,具有重要的生理
功能。
MAO 催化單胺類底物脫氨生成相應的醛,進一步氧化成酸,底物在 360nm 處有特征吸收峰,通過測定 360nm
處光吸收下降的速率,可計算 MAO 活性。
Monoamine Substrate360nm Acids
注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者
增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 UV 板、
震蕩儀、蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1 臨用前根據(jù)實驗用量取出部分提取液一、提取液二和試劑一置于 4℃預冷 30min。
2、 組織樣本:按照樣本質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL
提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿;1000g 4℃離心 10min,取上清,將上清液轉(zhuǎn)移至預冷的離心管,于 10000g
4℃離心 30min。棄上清,沉淀中加入 1mL 預冷的提取液二,振蕩混勻,于 16000g,4℃離心 40min,棄上清,加
1mL 試劑一,振蕩混勻,置冰上待測。
3 細菌或細胞樣本:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細菌或細胞數(shù)量(10
4
個):提取液
一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一)加入提取液一,超聲波破碎
細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 7s,總時間 3min),1000g4℃離心 10min,取上清,將上清液
轉(zhuǎn)移至預冷的離心管,于 10000g,4℃離心 30min。棄上清,沉淀中加入 1mL 預冷的提取液二,振蕩混勻,于 16000g,
4℃離心 40min,棄上清,沉淀中加入 1mL 試劑一,振蕩混勻,置冰上待測。
MAO
 
 
BC0015 -- 2 頁,共 3
4、 血清(漿)或液體樣本:直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。
二、測定步驟
1、紫外分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 360nm,分光光度計用蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表(在微量石英比色皿/96 UV 板中依次加入下列試劑)
試劑名稱(μL
測定管
空白管
樣本(μL
20
-
試劑一(μL
160
180
試劑二(μL
20
20
將上述試劑分別加入微量石英比色皿/96 UV 板中,迅速吹打混勻,分別測定 360nm 10s
吸光值,記為 A 測定管 1、A 空白管 1;然后置于 37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準確反應 2h,測定 360nm
吸光值,記為 A 測定管 2A 空白管 2,計算 ΔA 測定=A 測定管 1-A 測定管 2,ΔA 空白= A 空白管 1-A
空白管 2ΔA=ΔA 測定-ΔA 空白。空白管只需測 1-2
三、MAO 活力的計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下:
1、按樣本蛋白質(zhì)濃度計算
酶活定義:37℃pH7.6 條件下,每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO 活性(U/mg prot= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V ×Cpr)÷T=57.08×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 mg 組織每分鐘消耗 1nmol 底物定義的酶量為一個酶活單位。
MAO 活性(U /g 質(zhì)量)= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V ÷V 樣總×W)÷T=57.08×ΔA÷W
3、按細菌/細胞數(shù)量計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 10
4
細菌/細胞每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO 活性(U /10
4
cell= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V ÷V 樣總×細胞數(shù)量)÷T=57.08×Δ細胞數(shù)量
4 按照樣本體積計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 mL 血清或液體樣本每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量為一個酶活單位。
MAO 活性(U /mL?÷d ×V 反總×10
9
÷V ÷T= 57.08×ΔA
ε:底物摩爾消光系數(shù):1460L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cmV 反總:反應總體積,0.0002L;V 樣:加入
樣本體積,0.02mLV 樣總:提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應時
間,120min10
9
:單位換算系數(shù),1mol=10
9
nmol
b.用 96 UV 板測定的計算公式如下:
1、按樣本蛋白質(zhì)濃度計算
酶活定義:37℃pH7.6 條件下,每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO 活性U /mg prot= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V ×Cpr)÷T= 95.13×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 g 組織每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO 活性U /g 質(zhì)量)= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V ÷V 樣總×W)÷T= 95.13×ΔA÷W
3、按細菌/細胞數(shù)量計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 10
4
細菌/細胞每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO 活性U /10
4
cell= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V ÷V 樣總×細胞數(shù)量)÷T= 95.13×Δ細胞數(shù)量

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