一、目的與要求：
1、明確亞硝酸鹽的測定與控制成品質(zhì)量的關(guān)系。
2、明確與掌握鹽酸萘乙二胺法的基本原理與操作方法。
二、原理：
樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除去脂肪后，在弱酸條件下硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再與萘基鹽酸二氨乙烯偶聯(lián)成紫紅色的重氮染料，產(chǎn)生的顏色深淺與亞硝酸根含量成正比，可以比色測定。反應(yīng)式如下：
三、試劑與儀器-中華試劑網(wǎng)提供
1、亞鐵氰化鉀溶液：稱取106克亞亞鐵氰化鉀[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，稀釋至1000毫升。
2、乙酸鋅溶液：稱取220克乙酸鋅，二水[Zn(CH2C00)2·2H20]，加30毫升冰乙酸溶于水，并稀釋至1000毫升。
3、飽和硼砂溶液：稱取5克十水四硼酸鈉(Na2B07·10H20)，溶于100毫升熱水中，冷卻后備用。
4、0.4％對氨基苯磺酸溶液：稱取0.4克對氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的鹽酸中，避光保存。
5、0.2％鹽酸萘乙二胺溶液：稱取0.2克鹽酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。
6、亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取0.1000克于硅膠干燥器中干燥24小時(shí)的亞硝酸鈉，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于200微克亞硝酸鈉。
7、亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用前，吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于5微克亞硝酸鈉。
8，小型絞肉機(jī)。
9、分光光度計(jì)。
四、操作方法：
1、樣品處理：稱取5.0克經(jīng)絞碎混勻的樣品，置于50毫升燒杯中，加工2.5毫升飽和溶液，攪拌均勻，以70℃左右的水約30毫升將樣品全部洗入500 毫升容量瓶中，置沸水浴中加熱15分鐘，取出后冷至室溫，然后一面轉(zhuǎn)動(dòng)一面加入5毫升亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入5毫升乙酸鋅溶液以沉淀蛋白質(zhì)，加水至 刻度，混勻，放置0.5小時(shí)，除去上層脂肪，清液用濾紙過濾棄去初濾液30毫升，濾液備用。
2、測定
吸取40毫升上述濾液于50毫升比色管中，另吸取0.00、0.20、0．40、0．60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50毫升亞硝酸 鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0、1、2、3、5、7、10、12.5微克亞硝酸鈉)，分別置于50毫升比色管中，于標(biāo)準(zhǔn)與樣品管中分別加入2毫升0.4％對氨基 苯磺酸溶液，混勻，靜置3-5分鐘后各加入1毫升0.2％鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混勻，靜置15分鐘，用2厘米比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長 538nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。
計(jì)算： X=(A×1000)/(m×40/500×1000×1000)
X：樣品中亞硝酸鹽的含量，g／kg；
m：樣品質(zhì)量，g；