FDA水解酶活性檢測(cè)試劑盒
操作步驟:
一、 樣本處理稱取風(fēng)干過(guò) 30-50 目篩土壤約 0.1g,備用。
二、 測(cè)定操作表空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 對(duì)照管 測(cè)定管樣本(g) 0.05 0.05 標(biāo)準(zhǔn)液(μL) 40 雙蒸水(μL) 40 試劑一(μL) 200 200 240 200 試劑二(μL) 40 充分混勻,30℃,震蕩 1h 試劑三(mL) 160 160 160 160 10000g,25℃,離心 5min,取 200μL 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測(cè)定 490nm 處吸光值 A,△ A1=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管,△ A2=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
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FDA水解酶活性檢測(cè)試劑盒
標(biāo)準(zhǔn)液:液體 4mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑 1 瓶,-20℃避光保存,臨用前加 4mL 試劑三溶解。
試劑三:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。
酶活性計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
酶活性定義:每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。 FDA 活性(μmol/d/g)=(△ A2÷△ A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品)×V 反總÷W = 2.4×(△ A2÷△ A1)÷W
b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
酶活性定義:每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。 FDA 活性(μmol/d/g)=(△ A2÷△ A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品)×V 反總÷W = 2.4×(△ A2÷△ A1)÷W C 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品濃度 100μmol/L;V 反總:反應(yīng)總體積,0.4mL;W:樣本質(zhì)量,g
注意事項(xiàng):
1. 盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品,否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性。
2. 測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),若吸光值較高,請(qǐng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。