土壤中性蛋白酶活性檢測試劑盒 微量法
土壤中性蛋白酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
產地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓
英文名稱：Soil neutral protease activity detection kit
產品商標：solarbio
注意：正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
貨號：BC0275
規(guī)格：100T/48S
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關鍵詞：土壤中性蛋白酶|土壤中性蛋白酶活性檢測|蛋白酶活性檢測
購買鏈接：BC0275 產品規(guī)格檢索 (labgogo.com)
產品內容：
試劑一：液體20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入10mL試劑一，沸水浴攪拌溶解后待用；
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入10mL 蒸餾水充分溶解待用；
試劑四：液體20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑五：液體5mL×1 瓶，4℃保存；
標準品：液體1mL×1 支，0.2 μmol/mL 酪氨酸溶液，4℃保存。
產品說明：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質以及其他含蛋白質氮的有機化合物的轉化，其水解產物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶在中性環(huán)境下催化蛋白質水解，與土壤有機質含量、氮素及其他土壤性質有關。中性條件下，土壤中性蛋白酶可將酪蛋白水解產生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍，在680nm 有特征吸收峰。
實驗中所需儀器及設備：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液槍、微量比色皿/96孔板、甲苯、蒸餾水、50目篩（或更小）。
樣品處理：
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50 目篩。
操作步驟：
1、分光光度計/酶標儀預熱30min 以上，調節(jié)波長680nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定：
試劑名稱 測定管 對照管 標準管 空白管
風干土樣（g） 0.05 0.05 - -
試劑一（μL） 50 50 - -
試劑二（μL） 100 - -
混勻后，37℃反應24h，期間振蕩5-6 次，使土樣與反應液充分接觸。
試劑三（μL） 100 100 - -
試劑二（μL） - 100 - -
混勻，10000rpm 室溫離心10min，取上清液
上清液（μL） 44 44 - -
標準液（μL） - - 44 -
蒸餾水（μL） - - - 44
試劑四（μL） 130 130 130 130
試劑五（μL） 26 26 26 26
混勻，40℃水浴10min，10000rpm 室溫離心10min，取上清液于680nm 下讀取各管吸光值A，分別記為A 測定管、A 對照管、A 標準管、A 空白管，計算ΔA 測定=A 測定管-A 對照管，ΔA 標準=A 標準管-A 空白管。
注意：標準管、空白管只需測一次。每個測定管設一個對照管。
土壤中性蛋白酶活性計算：
單位定義：每天每g土樣中產生1μmol 酪氨酸為一個土壤中性蛋白酶活力單位。土壤中性蛋白酶(U/g)=C標準×ΔA測定÷ΔA標準×V 反總÷W÷T= 0.05×ΔA測定÷ΔA標準÷W。
C 標準管：標準管濃度，0.2 μmol/mL；
V 反總：反應體系總體積，0.25mL；
T：反應時間，1d；
W：樣本質量，g。
注意事項：
1、當吸光值大于1.5時，建議將上清液稀釋后進行測定，計算時注意乘以稀釋倍數(shù)。
相關文獻：
《Evaluating the effects of phytoremediation with biochar additions on soil nitrogen mineralization enzymes and fungi》 作者:Manyun Zhang,Jun Wang, Shahla Hosseini Bai, Ying Teng,Zhihong Xu 期刊:Environmental Science and Pollution Research 影響因子:2.914 PMID:29860689